色譜柱的再生，這大概是一種美好的愿望，但是對于我們這種經(jīng)費少的單位，只能死馬當活馬醫(yī)治，所以再生的手段是必不可少的。再生要根據(jù)色譜柱的具體類型來選擇再生方式，當然，前面也說過了，再生這個詞用在這里是不太恰當?shù)?。那么什么問題會導(dǎo)致我們要對色譜柱進行再生呢？
        通常，樣品中含有一些對分析者來說不感興趣的東西。鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)是一些可能在使用時與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。這些物質(zhì)有比分析者的目標物或少或大的保留值。那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來說在空體積時就被沖出色譜柱。這些非目標產(chǎn)物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰，氣泡，基線上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會積累在柱頭。這些行為通常只有通過平行實驗才能發(fā)現(xiàn)。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現(xiàn)為寬峰，基線擾動，或者基線漂移。有時候這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使他們開始形成新的固定相。分析物能與這些雜質(zhì)作用形成一定的分離機理。保留時間會波動，拖尾會出現(xiàn)。如果足夠的污染產(chǎn)生，柱子的反壓能超過泵所能承受的相當大壓力，使柱子無法工作以及在堵塞處產(chǎn)生空體積。這時，我們就要對色譜柱進行再生，有的時候是和清洗混到一起的。

再生反相色譜柱
1、首先倒轉(zhuǎn)柱子。
2、以大約相當佳流速的40%的流速沖洗柱子大約45-60分鐘，使用的溶劑的順序要按照水—甲醇—異丙醇—二氯甲烷—異丙醇—甲醇—水進行。
3、柱子轉(zhuǎn)回正常方向，使用分析所用洗脫液平衡。
注意：在使用另外的淋洗方法的時候，一定要先用水開始沖洗以去除緩沖液，保證其后的洗脫液可以混溶。詳細見梯度洗脫需要注意到問題我也會另辟文章詳細寫一***動相的互溶問題。
再生**柱
1、首先倒轉(zhuǎn)柱子。
2、以大約相當佳流速的40%的流速沖洗柱子大約45-60分鐘，使用的溶劑的順序要按照異辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的異辛烷（或己烷）進行。
3、柱子轉(zhuǎn)回正常方向，使用分析所用洗脫液平衡。
而對于再生極性鍵合柱，取決于使用的條件，可以使用反相的條件，也可以使用**柱的條件。
一定要注意到是：再生會導(dǎo)致柱效降低，另外***不要使用酮類或醛類沖洗氨基柱，因為可能與固定相發(fā)生反應(yīng)。四氫呋喃作為替代可以使用。
進行色譜柱再生時，我們建議相當好不適用您的高效液相色譜儀上的泵。下表是建議用來沖洗的溶劑體積：

請根據(jù)您的實際情況，選擇正確的再生方法：
1、極性固定相(如Si，NH2*、DIOL基色譜填料)的再生：
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→**→乙醇→水**
2、非極性固定相(如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等)的再生：
水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水
3、0.05M**可以用來清洗已污染的色譜柱。
注意：
*在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
**如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去**表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M**沖洗非常有效。